Nový objektív pre Leica STED!

Vážení priatelia mikroskopie,

radi by sme Vám predstavili nový objektív pre Leica STED. Objektívy pre STED mikroskopiu čiže nanoskopiu kladú vysoké nároky na optické vlastnosti pre zachytenie tých najmenších detailov. Inžinieri v Leica označujú rad objektívov pre STED značkou STED WHITE. Toto označenie v sebe ukrýva optimálne prekrytie excitácie a STED PSF v osi Z pre viditeľné spektrum. Ako zdroj excitácie sa odporúča používať biely laser, ktorý ponúka až 200 vlnových dĺžok a v kombinácii s deplečnými lasermi pre STED 592/660/775 ponúka veľkú slobodu v použití rôznych fluorofórov.

V súčasnosti ponúkame štandardný objektív STED WHITE olejový objektív (HC PL APO 100x/1.40 OIL), ktorý slúži predovšetkým pre fixované preparáty s vysokou numerickou apertúrou a dobrým rozlíšením.

Obr. 1: Porovnanie objektívov pre STED

Rozširujeme ponuku o objektív STED WHITE Glycerínový objektív (HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR), ktorý je komplexnejší pre „live cells“ experimenty. Tento objektív ponúka motorizovaný korekčný krúžok, ktorý dokáže nastaviť optické šošovky a korigovať tak rôzne hrúbky krycieho sklíčka pri zmene teploty a homogenity vzorky. S týmto objektívom je možné potom snímať s tými najlepšími optickými vlastnosťami nielen pri izbovej teplote, ale tiež napr. pri 37 °C. Obrázok znázorňuje porovnanie dvoch ponúkaných objektívov a ich závislosť fokusovania v µm na vlnových dĺžkach viditeľného spektra.

Gated STED a možnosti zlepšenia rozlíšenia nielen pre „live cells“ experimenty! Táto funkcia je aj s novým objektívom stále k dispozícii. Navyše s použitím špeciálnych hybridných detektorov (HyD) máte možnosť výrazne vylepšiť pomer signál/šum a získate neuveriteľné výsledky už v RAW formáte. Na obr. 2 je zobrazené porovnanie konfokálneho obrázku a STED obrázkov s novým objektívom a funkciou gating.

Obr. 2: porovnanie konfokálneho obrázku so STED obrázkom

(Living T cell in suspension. 3D reconstruction of confocal and STED stacks. Maximum projection. Courtesy of Marco Fritsche, Mathias Clausen and Christian Eggeling, MRC Human Immunology Unit, Weatherall Institute of Molecular Medicine, University of Oxford, UK.)

Super-rozlišovacia mikroskopia čiže nanoskopia v kombinácii s optickou metódou „clearingu“ lokalizuje veľmi ľahko membránové proteíny v obličkách.

Pre tieto zobrazovacie metódy je zásadná špeciálna príprava vzoriek. Pri práci s tkanivami v takomto rozlíšení môže hrať veľkú úlohu aj autofluorescencia pozadia.

• Optický clearing nie je len technikou určenou na prípravu vzoriek pre nanoscopiu. Môže byť tiež prínosná pre zobrazovanie v nanoškále.
• Táto metóda dramaticky zvyšuje pomer signálu k šumu, čo umožňuje pozorovanie aj tých najjemnejších prvkov tkanív.
• Zvýšená transparentnosť opticky vyčistenej vzorky umožňuje objemový 3D STED imaging pri rozlíšení nižším než je difrakčný limit.

Video zobrazuje možnosti a porovnanie štandardného objektívu s novým objektívom HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR a s použitím clearingovej metódy.

Link pre sledovanie a stiahnutie videa tu.

Video s porovnávaním objektívov (Deep nanoscopy 45-65 µm inside cleared adult kidney sample. 20 µm xyz stack confocal/3D STED. Nephrin visualized with STAR 635P. Clearing by modified CLARITY protocol. STED lens: HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR – STED WHITE. Sample courtesy of David Unnersjö-Jess, KTH, Stockholm, Sweden.)

Pre viac informácií nás prosím neváhajte kontaktovať na kopecky@pragolab.cz .