Dostupný reliéfny kontrast pre vzpriamené mikroskopy
Dnes sa spolu zameriame na problematiku školských vzpriamených mikroskopov.
Tieto mikroskopy sú logicky prístroje s najjednoduchšou konštrukciou a väčšinou
aj s iba základnými možnosťami pozorovania.
Kým sú vzorky farbené, či rastlinného pôvodu, zaručí aj základný kvalitný mikroskop
plnohodnotný zážitok s možnosťou pozorovania všetkých potrebných štruktúr. Kameň
úrazu sa zjaví vo chvíli, keď chceme mikroskopom pozorovať široké spektrum vzoriek.
Obzvlášť vo chvíli, keď kvôli nedostatku času či financií nie je priestor pre riadne
farbenie a fixáciu vzorky. A to je práve prípad výukových mikroskopov, kedy je
hlavným cieľom ukázať študentom všetko, čo je len možné, bez nutnosti zložitej
úpravy vzorky, a ideálne v pôvodnej, prirodzenej podobe. A tu sa rozvíja priestor
pre implementáciu kontrastných techník.
Vzpriamené transmisné mikroskopy umožňujú väčšinou okrem pozorovania vo svetlom
poli pozorovanie v tmavom poli (DF - z angl. darkfield), fázovom kontraste
(PH - z angl. phase contrast), polarizácii (POL) a v Nomarskiho diferenciačnom
kontraste (DIC - z angl. differential interference contrast).
Tmavé pole
Tmavé pole je väčšinou prvá z kontrastných metód, ktorá je pre výučbu použitá.
Jej nespornou výhodou je nízka obstarávacia cena a zvýšená rozlišovacia schopnosť,
obzvlášť v oblasti okrajových štruktúr. Táto metóda je výborná pre pozorovanie
napr. prvokov, vírnikov, pomaliek, chvostoskokov a pod.
Obr. 1 - Príklad temného poľa na snímke rias
Fázový kontrast
Veľmi účinná kontrastná metóda, ktorá však vyžaduje použitie špeciálnych objektívov.
Okolo objektov vzniká silný „halo efekt“ a farebná kompozícia snímky je úplne zmenená.
Ideálne použitie je napr. pri pozorovaní jednotlivých buniek, spermií a baktérií.
Obr. 2 - Chuťové poháriky vo fázovom kontraste. Výrazné navýšenie kontrastu sprevádza typická zmena farebného zloženia obrázku
Polarizácia
Špecifická kontrastná metóda. Pri pozorovaní geologických rezov je nenahraditeľná,
avšak v pozorovaní živočíšnych a rastlinných preparátov nehrá tak dôležitú úlohu.
Je však výborná pre zobrazenie kryštálov v tkanivách a roztokoch, zvýraznenie
špecifických štruktúr, či látok, napr. žlče.
Obr. 3 - Vlákno ovčej vlny vo svetlom poli a polarizácii
DIC
Kráľ kontrastných metód, obzvlášť u vzpriamených mikroskopov. Táto kontrastná metóda
prináša 3D reliéfny kontrast bez akéhokoľvek zníženia výsledného rozlíšenia. Bohužiaľ,
navýšenie ceny mikroskopu je také výrazné, že ani rutinné laboratóriá si často nemôžu
takú investíciu dovoliť, nieto školské pracoviská. Navyše správne nastavenie Nomarskiho
kontrastu je pomerne zložité a určite nie je vhodné pre študentov.
Obr. 4 - Spermie v DIC kontraste. Môžete si všimnúť 3D priestorového efektu pri vysokom rozlíšení detailov
Z tohto zhrnutia je vidieť, že nie je veľa kontrastných techník vhodných pre študentské
laboratóriá. Aj preto sa spoločnosť PRAGOLAB s.r.o. rozhodla spojiť sily so spoločnosťou
Lumicra Microsolutions pri vývoji nových inzertov pre šikmé osvetlenie.
Šikmé osvetlenie
Šikmé osvetlenie (oblique ilumination) je svojím princípom jednoduchá, ale veľmi účinná metóda, ako zlepšiť kontrastné možnosti Vašich mikroskopov. Vzniká zasunutím špecifickej vložky do kondenzorovej štrbiny. Vzorka si ponecháva pôvodné farebné spektrum a jeho štruktúra sa stáva 3D reliéfnou. Nie sú potrebné špeciálne objektívy, o všetko sa postará kondenzorová vložka.
![]() |
![]() |
Obr. 5 a 6 - Porovnanie vykreslenia epitelových buniek ústnej dutiny vo svetlom poli a šikmom osvetlení a porovnanie svetlého poľa, fázového kontrastu a šikmého osvetlenia na snímke žľazy hmyzu
Kompatibilita
Vložky šikmého osvetlenia sú kompatibilné predovšetkým s mikroskopmi Leica DM500
a DM750. Primárne určenie týchto mikroskopov pre študentské účely z nich urobili
prvú voľbu pre úpravu týchto inzertov. Teraz majú mikroskopy Leica DM500 a DM750
okrem temného poľa, fázového kontrastu, polarizácie a fluorescencie navyše možnosť
i šikmého osvetlenia. Dostupné kontrastné metódy, ktoré posunú možnosti Vašich
študentov o krok ďalej.
A čo rutinné laboratóriá?
Vložky sú určené pre kondenzory no. 1113613. Tieto kondenzory sú primárne určené pre
školské mikroskopy
Leica DM500 a DM750
, avšak sú kompatibilné aj s laboratórnymi mikroskopmi
Leica DM1000 – DM2500
.
Ak Vás táto kontrastná metóda zaujala, neváhajte nás kontaktovať. Radi Vám vložky osobne
predvedieme, či s Vami skonzultujeme kompatibilitu s Vašim existujúcim mikroskopom.
Obr. 7 - Slidery šikmého osvetlenia
Pre viac informácií a možné rezervácie nás, prosím, kontaktujte na adrese:
mikroskopie@pragolab.cz
Váš tím PRAGOLAB s.r.o.
Nenechajte si ujsť ďalšie zaujímavosti
- Thermo Scientific SMART chromatografické striekačky
- LC-MS/MS kvantifikácia voľných metanefrínov v ľudskej plazme pre klinický výskum
- Kvantifikácia ôsmich antimykotík v ľudskej plazme pomocou kvapalinovej chromatografie - tandemovej hmotnostnej spektrometrie pre klinický výskum
- Biopsia dychu pomocou technológie GC-Orbitrap – neinvazívny prístup k odhaleniu choroby?
- Ultrazvuková pasterizácia omáčok, džúsov a nápojov