Rýchle, automatické a presné stanovenie prchavých látok v krvi pomocou plynovej chromatografie s dávkovaním vzorky technikou headspace (HS)
Stanovenie obsahu alkoholov v krvi pomocou plynovej chromatografie s headspace dávkovaním a plameňovo-ionizačným detektorom (FID) je jeden z najbežnejších testov v toxikologickej a foreznej oblasti. Predstavujeme Vám rýchly, automatický a reprodukovateľný spôsob analýzy pomocou chromatografického systému pozostávajúceho z autosamplera TriPlus™ 300 Headspace (Thermo Scientific) a plynového chromatografu TRACE™ 1310 (Thermo Scientific) so softvérom Chromeleon™ CDS.
Systém je vybavený dvomi plameňovo-ionizačnými detektormi (FID) a jedným SSL injektorom s headspace vyparovacou komôrkou (linerom) a dvomi kapilárnymi kolónami: (1) Thermo Scientific™ TraceGOLD™ TG-ALC 1 (30 m x 0,32 mm x 1,8 μl) a (2) TraceGOLD™ TG-ALC 2 (30 m x 0,32 mm x 1,2 μl). Obe kapilárne kolóny sú spojené so SSL injektorom cez 5 m x 0,32 mm deaktivovanú predkolónu pomocou press tight konektoru v tvare Y. Po optimalizácii analytických podmienok pomocou štandardizovanej zmesi alkoholov v krvi (Restek™blood alcohol mix resolution standard) spoločne s n-propanolom ako vnútorným štandardom (obr. 2) boli získané kalibračné krivky pre metanol, etanol, izopropanol a acetón (najbežnejšie analyty pri stanovení alkoholov v krvi) tak s vnútorným štandardom (n-propanol) aj bez neho s excelentnou linearitou (príklad viď obr. 3) a opakovateľnosťou (tab. 1).
Obr. 1: TriPlus™ 300 Headspace autosampler a plynový chromatograf TRACE™ 1310
Obr. 2: Rozdelenie štandardnej zmesi alkoholov (Restek) s vnútorným štandardom (n-propanol) 0,1 g/dl na kolóne 1 (TraceGOLD™ TG-ALC 1) – hore – a na kolóne 2 (TraceGOLD™ TG-ALC 2) – dole
Obr. 3: Príklad kalibračných kriviek pre metanol a etanol
Alkohol | RSD% |
Metanol | 0,78 |
Etanol | 0,75 |
n-Propanol | 0,85 |
Tabuľka 1: RSD% plochy píkov pre alkoholy pre 20 dávkovaní
Príprava vzorky: k 1 ml biologickej vzorky v headspace vialke s objemom 20 ml, pridať 120 μl (1mg/ml) n-propanolu ako vnútorného štandardu. Takto pripravenú vzorku uzavrieť vo vialke a premiešať. Vialku vložiť do TriPlus 300 Headspace autosamplera. Konfigurácia a manipulácia s TriPlus 300 Headspace autosamplerom a TRACE 1310 GC je potom veľmi komfortná vďaka dotykovému displeju či softvéru Chromeleon CDS (tab. 2).
Systém sa stal spoľahlivým automatickým riešením pre analýzu obsahu alkoholov v krvných vzorkách. Autosampler na 120 vzoriek s možnosťou inkubácie až 18 vzoriek naraz zabezpečí dostatočnú kapacitu pre analýzy pre všetky toxikologické laboratóriá. Pre automatizáciu celého postupu je možné použiť aj čítačku čiarových kódov, kedy je plne zachovaná „anonymita“ vzorky, nepočítajúc možnosť použiť vzorky značené barkódom. Inertnosť a vysoká teplotná kapacita systému eliminuje krížovú kontamináciu vzorky, čo vedie ku konzistentným výsledkom. A v neposlednom rade Chromeleon CDS umožňuje – na užívateľsky veľmi príjemnej báze – celý systém riadiť, regulovať a vyhodnocovať.
TriPlus 300 Headspace | |
Inkubácia vzoriek | 15 min za pretrepávania |
Teplota pece | 70 °C |
Teplota rozdeľovača | 70 °C |
Teplota kapilár | 105 °C |
Tlakovanie | Zapnuté, tlak 1 bar, ekvilibračný čas 0,2 min |
Dávkovacia slučka | Zapnuté „Pressure“, tlak 1 bar, ekvilibračný čas 0,1 min |
Objem dávkovacej slučky | 1 ml |
Mód injektora | štandard |
Doba nástreku | 0,5 min |
Premývanie kapilár po nástreku | 1 min pri 80 ml/min |
Premývanie dávkovacej slučky | 1 min pri 100 ml/min |
TRACE 1310 | |
Separácia | Izotermická, 40 °C, 4 min |
SSL | 150 °C, split mód |
Split mód | Áno, pri prietoku 200 ml/min a rozdelovacom pomere 20:1 |
Nosný plyn | He pri prietoku 10 ml/min |
Teplota FID | 300 °C |
Tabulka 2. Konfigurácia autosamplera TriPlus 300 Headspace a GC TRACE 1310
S vyššie uvedeným chromatografickým systémom Thermo Scientific a ďalšími produktmi Vás radi osobne zoznámime na našom stánku na veľtrhu LABOREXPO v dňoch 20.–21.9.2017 v Kongresovom centre Praha.
Pôvodný článok nájdete na stiahnutie tu .
Nenechajte si ujsť ďalšie zaujímavosti
- Thermo Scientific SMART chromatografické striekačky
- LC-MS/MS kvantifikácia voľných metanefrínov v ľudskej plazme pre klinický výskum
- Kvantifikácia ôsmich antimykotík v ľudskej plazme pomocou kvapalinovej chromatografie - tandemovej hmotnostnej spektrometrie pre klinický výskum
- Biopsia dychu pomocou technológie GC-Orbitrap – neinvazívny prístup k odhaleniu choroby?
- Ultrazvuková pasterizácia omáčok, džúsov a nápojov